免疫測定在臨床檢驗中的應(yīng)用

　　1.酶免疫測定（enzyme immunoassay）：可分為均相（homogenous）和非均相（heterogenous）兩種類型。在均相EIA中可不需進行游離的和結(jié)合的標記物的分離而直接測定標記物。例如在某種條件下，抗原抗體反應(yīng)后形成的酶標記抗原抗體復(fù)合物中的酶失去其對底物作用的活力，因而測出的酶活力直接反映游離的酶標記物。均相EIA在臨床檢驗中較少應(yīng)用。非均相EIA需先進行游離的和結(jié)合的標記物的分離。如前所述，固相載體可用作一種分離手段。

　　2.免疫測定在臨床檢驗中的應(yīng)用：由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應(yīng)的抗原，因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣，在臨床檢驗中可用于測定：
　　1）體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
　　2）激素，包括小分子量的甾體激素等。
　　3）抗生素和藥物。
　　4）病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
　　5）另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。

　　3．標記的免疫測定：如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應(yīng)后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達5~10μg/ml，但在臨床檢驗中，某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記，通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和酶免疫測定中，標記物分別為放射性核素和酶，最后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量，敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標記免疫測定中，一般加入過量的標記試劑以保證與待測物徹底反應(yīng)。以標記抗體（Ab※）檢測抗原（Ag）為例，反應(yīng)式如下：Ag+Ab※→AgAb※+Ab※
　　在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※，如不將兩者分離而測定標記物，測得的結(jié)果將為兩者之和。因此，游離標記物與結(jié)合標記物的分離是標記免疫測定中的重要步驟。可采用多種手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與標記的抗原或抗體直接反應(yīng)，結(jié)合的標記物被固定在載體上，而游離的標記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab※除去，結(jié)合標記物的測定可在固相上進行。