蛋白質(zhì)的定量測定實驗

　　蛋白質(zhì)定量是生物化學、食品檢驗和其它生命學科最常涉及的分析內(nèi)容，是臨床診斷的重要指標，也是許多生物制品、藥物、食品質(zhì)量檢測的重要指標。生化實驗中，在對生化藥品，特別是蛋白質(zhì)、酶、某些多肽或蛋白質(zhì)激素的分離純化時，對蛋白質(zhì)進行準確可靠的定量分析是非常重要的。

　　然而蛋白質(zhì)的種類很多，結(jié)構(gòu)不均一，分子量又相差很大，功能各異，這給建立一個理想而又通用的蛋白質(zhì)定量分析的方法帶來了很大的困難。目前測定蛋白質(zhì)含量的方法有很多種，不同的方法各有其特點。

　　紫外分光光度法是根據(jù)蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)來對蛋白質(zhì)進行定量的;而凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法、BCA法、膠體金法測試根據(jù)蛋白質(zhì)的化學性質(zhì)來實現(xiàn)對蛋白質(zhì)進行定量的;根據(jù)蛋白質(zhì)的染色性質(zhì)的不同，又建立了考馬氏亮藍染色法和銀染法;此外還有人在這些蛋白質(zhì)定量方法的基礎(chǔ)上建立了熒光法。

　　由于每種方法都有其自身的特點和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當?shù)牡鞍踪|(zhì)測定方法，以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果最精確，但操作復雜，用于大批量樣品的測試則不太合格;雙縮脲法操作簡單，線性關(guān)系好，但靈敏度差，樣品需要量大，測量范圍窄，因此在科研上的應(yīng)用受到限制;而酚試劑法彌補了它的缺點，它結(jié)合了雙縮脲法中銅鹽反應(yīng)與Folin-ciocalteau試劑反應(yīng)的特點，因而在科研中被廣泛采用，但是它的干擾因素較多;考馬氏亮蘭染色法因其靈敏而簡便開始重新受到關(guān)注;BCA法以其試劑穩(wěn)定，抗干擾能力較強，結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度高而受到歡迎;而膠體金法具有較高的靈敏度，可達到毫微克水平，用于微量蛋白的測定。

方   法	測定范圍 （μg/ml）	不同種類 蛋白的差異	最大吸收 波長（nm）	特                 點
凱氏定氮法		小		標準方法，準確，操作麻煩，費時，靈敏度低，適用于標準的測定
紫外分光光度法	100—1000	大	280 205	靈敏，快速，不消耗樣品，核酸類物質(zhì)有影響
雙縮脲法	1000—10000	小	540	重復性、線性關(guān)系好，靈敏度低，測定范圍窄，樣品需要量大
Folin-酚試劑法	20—500	大	750	靈敏，費時較長，干擾物質(zhì)多
考馬氏亮藍G-250	50—500	大	595	靈敏度高，穩(wěn)定，誤差較大，顏色會轉(zhuǎn)移
BCA	50—500	大	562	靈敏度高，穩(wěn)定，干擾因素少，費時較長