細(xì)胞培養(yǎng)四部曲

　　1.細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)條件為含有 10% 胎牛血清的培養(yǎng)液(根據(jù)不同的細(xì)胞選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)液)，37℃下在含有 5% CO2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　2.細(xì)胞凍存：細(xì)胞消化后收集， 1000rpm 離心 5min ，去上清，用 1ml 含有 10% DMSO的培養(yǎng)液重懸，逐級降溫后轉(zhuǎn)入-70℃凍存 24h，轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。

　　3.細(xì)胞復(fù)蘇：將液氮中凍存的細(xì)胞取出， 37℃水浴中融化，取出后 1000rpm 離心 5min ，去上清，用培養(yǎng)液重懸后接入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

　　4.細(xì)胞傳代：對于貼壁細(xì)胞將培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的培液吸干， 用滅過菌的 1×PBS 沖洗后加入一定量的 0.25% 胰酶消化，待鏡下觀察細(xì)胞變圓且還未漂起時，加入有血清的正常培液終止消化，吹打細(xì)胞成細(xì)胞懸液后將細(xì)胞接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。對于懸浮細(xì)胞可以直接傳代也可以離心法傳代。直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。