生化與分子生物學(xué)常用緩沖液的配制

　　常用緩沖液：

　　TE

　　pH7.4

　　10mmol/LTrisCl(pH7.4)

　　1mmol/LEDTA(pH8.0)

　　pH7.6

　　10mmol/LTrisCl(pH7.6)

　　1mmol/LEDTA(pH8.0)

　　pH8.0

　　10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

　　1mmol/LEDTA(pH8.0)

　　STE(亦稱TEN)

　　0.1mmol/LaCl

　　10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

　　1mmol/LEDTA(pH8.0)

　　STET

　　0.1mmol/LaCl

　　10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

　　1mmol/LEDTA(pH8.0)

　　5%TritoX-100

　　TNT

　　10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

　　150mmol/LaCl

　　0.05%Twee20

　　電泳緩沖液

　　Tris-乙酸(TAE)：50×濃貯存液(每升)：242gTri堿

　　5 7.1ml冰乙酸

　　100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

　　使用時(shí)再稀釋50倍。

　　Tris-磷酸(TPE)：10×濃貯存液(每升)：108gTri堿

　　15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)

　　40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

　　使用時(shí)再稀釋10倍。

　　Tris-硼酸(TBE)：5×濃貯存液(每升)：54gTri堿

　　27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

　　使用時(shí)再稀釋10倍。

　　堿性緩沖液：1×使用液(每升)：5ml10mol/LaOH

　　2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

　　Tris-甘氨酸：5×濃貯存液(每升)：15.1gTri堿

　　94g甘氨酸(電泳級)(pH8.3)

　　50ml10%SDS(電泳級)

　　2×SD凝膠加樣緩沖液

　　100mmol/LTris?HCl(pH6.8)

　　200mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)

　　4%SDS(電泳級)

　　0.2%溴酚藍(lán)

　　20%甘油

　　30%丙烯酰胺：

　　將29g丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中，加熱至37℃溶解之，補(bǔ)加

　　水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾除菌查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中

　　保存于室溫。

　　10mol/L乙酸銨：

　　把770g乙酸銨溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾除菌。

　　1mol/LCaCl2：

　　在200ml純水中(Milli-Q水或相當(dāng)級別的水)溶解54gCaCl2?6H2O，用0.22濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃。

　　2.5mol/LCaCl2：

　　在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O，用0.22濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

　　1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)：

　　用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT，過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

　　0.5mol/LEDTA(pH8.0)：

　　在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O)，在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分裝后高壓滅菌備用。

　　溴化乙錠(10mg/ml)：

　　在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。

　　1mol/LMgCl2：

　　在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O，用水定容至1升，分裝成小份并高壓滅菌備用。

　　酚：氯仿：

　　把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層，保存于4℃。

　　磷酸緩沖鹽溶液：

　　在800ml蒸餾水中溶解8gaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，高壓蒸汽滅菌20min。保存于室溫。

　　乙酸鉀溶液(用于堿裂解)：

　　在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。

　　3mol/L乙酸鈉(pH5.2和7.0)：

　　在800ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH至7.0，加水定容至1升，分裝后高壓滅菌。

　　1mol/LTris：

　　在800ml水中溶解121.1gTris堿，加入濃HCl調(diào)節(jié)pH至所需值。

　　pHHCl

　　7.470ml

　　7.660ml

　　8.042ml

　　應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值，加水定容至1升，分裝后高壓滅菌。

　　Tri緩沖鹽溶液(T)：

　　在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿，加入0.015酚紅并用HCl調(diào)pH值至7.4，用蒸餾水定容至1升，分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡，于室溫保存。

　　5mmol/LNH4Ac溶液：

　　秤取乙酸銨192.7g，加重蒸水250ml混勻，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2滅菌20min。

　　10mg/mlA(小牛血清白蛋白)溶液：

　　秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?

　　10%十二烷基硫酸鈉(SDS)：

　　在900ml水中溶解100g電泳級SDS，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分裝備用。