液相色譜法分離中藥中的大黃素和大黃酸

   精密稱取大黃酸對照品0.00402g，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，制得對照品儲備液，取儲備液適量，加流動相制成1ml含201、4.02、8.04、12.06、20.10、40.20μg的對照品系列溶液，各依法進(jìn)樣20μl，按上述色譜條件進(jìn)行測定。

1色譜條件

在條件VertexC18液相色譜柱（150×4.6mm,5μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液85：15，檢測波長為254nm，流速為1ml·min-1。溫度：室溫20℃下，12min是大黃酸的保留時間約，與其它峰分開。

2儀器和試劑

LC-10T高效相色譜儀,VI2010S色譜數(shù)據(jù)處理軟件。甲醇（色譜純），重蒸餾水，其它試劑為分析純。由中國藥品生物制品檢定所提供的大黃酸對照品。樣品常通口服液為南方醫(yī)院藥學(xué)部試制。

3線性關(guān)系考察

精密稱取大黃酸對照品0.00402g，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，制得對照品儲備液，取儲備液適量，加流動相制成1ml含201、4.02、8.04、12.06、20.10、40.20μg的對照品系列溶液，各依法進(jìn)樣20μl，按上述色譜條件進(jìn)行測定。以大黃酸對照品濃度X為縱坐標(biāo)，峰面積Y（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為：Y=9.534×10-6X0.1934,相關(guān)系數(shù)r=1.0000。說明進(jìn)樣量在0.0402-0.804μg范圍內(nèi),對照品濃度與峰面積呈線性關(guān)系。

3對照品溶液與供試品溶液的制備

對照品溶液的制備：精密移取大黃酸對照品儲備液適量，加流動相稀釋為濃度為8.04μg/ml對照品溶液。

供試品溶液的制備：精密移取常通口服液10ml，加入1ml0.8%的磷酸溶液，加入甲醇定容至20ml，搖勻，離心10min，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

空白溶液的制備：取除大黃的藥味按同一工藝制成的缺大黃空白樣品0.2ml，按供試品溶液制備方法操作，即得。

4精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取8.04μg/ml的對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀,連續(xù)測定5次，大黃酸的平均峰面積為831543,RSD=0.18%（n=5）。表明結(jié)果精密度良好。

5穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取室溫保存的同一對照品溶液10μl,同法每間隔一定時間進(jìn)樣測定,共5次,結(jié)果表明供試品溶液在7天內(nèi)無明顯變化，表明此對照品基本穩(wěn)定,RSD=0.49%.

6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批常通口服液6份各10ml,依法測定,結(jié)果大黃酸含量的平均值為165.62,RSD=2.15%（n=6）。說明方法重復(fù)性較好.