水產(chǎn)品中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定-高效液相色譜法

　　1.范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定方法──高效液相色譜法。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品可食部分中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定。

　　2.規(guī)范性引用文件

　　下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

　　GB/T6682-1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

　　3.原理

　　樣品中呋喃唑酮用二氯甲烷提取，蒸發(fā)濃縮提取液，無(wú)水硫酸鈉去除水分，用正己烷液-液萃取除去脂肪及其它雜質(zhì)，離心，取下層清液經(jīng)膜過(guò)濾器后用高效液相色譜儀分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

　　4.試劑和材料

　　4.1乙腈：色譜純。

　　4.2二氯甲烷：色譜純。

　　4.3正己烷：分析純，用乙腈飽和。

　　4.485%磷酸：分析純。

　　4.5乙腈水溶液：乙腈 水(體積分?jǐn)?shù)為80 20)。

　　4.6無(wú)水硫酸鈉：分析純;經(jīng)640℃灼燒4.0h后，貯于密閉容器中備用。

　　4.7無(wú)水硫酸鈉柱：200mm×24mm(id)，內(nèi)裝50mm~100mm高的無(wú)水硫酸鈉。

　　4.8呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99.5%。

　　4.9呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取10.0mg呋喃唑酮，用乙腈水溶液溶解并稀釋定容至50mL棕色容量瓶中，在冰箱中冷藏保存，保存期一個(gè)月。該液1mL相當(dāng)于200μg呋喃唑酮。

　　4.10試驗(yàn)用水：符合GB/T6682一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。

　　5.儀器和設(shè)備

　　5.1高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器。

　　5.2高速組織搗碎機(jī)。

　　5.3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

　　5.3離心機(jī)。

　　5.4振蕩器。

　　5.5蒸發(fā)燒瓶，具塞。

　　5.6刻度離心管。

　　5.7膜孔濾器：0.45μm。

　　6.色譜條件

　　6.1色譜柱：C18柱,250mm×4.6mm(id)，粒度5μm。

　　6.2流動(dòng)相：乙腈 水 磷酸(體積分?jǐn)?shù)為40 60 0.1)。

　　6.3流速：0.8mL/min。

　　6.4檢測(cè)波長(zhǎng)：365nm。

　　6.5柱溫：室溫。

　　6.6進(jìn)樣量：20μL。

　　7.樣品測(cè)定

　　7.1試樣制備

　　取魚(yú)、蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)品可食部分，切成不大于5mm×5mm×5mm的小塊后混勻，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)搗碎即可，充分混勻。

　　7.2提取

　　稱(chēng)取搗碎樣品約10g(精確至0.01g)，加25mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15min，在振蕩器上振蕩5min，提取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉柱濾入蒸發(fā)燒瓶中，殘?jiān)�分別用25mL和15mL二氯甲烷按上述方法各重復(fù)提取一次，再用15mL二氯甲烷沖洗無(wú)水硫酸鈉柱，并采用洗耳球吹出柱中液體，濾液均濾入同一蒸發(fā)燒瓶中，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45℃左右水浴下減壓蒸發(fā)去除溶劑，蒸發(fā)速度控制在每秒一滴。

　　7.3凈化

　　用1.0mL流動(dòng)相和1.0mL正己烷溶解殘?jiān)�并充分洗滌蒸發(fā)燒瓶，將液體移入離心管中，在4000r/min離心5min，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，再向離心管中加入1.0mL正己烷，混勻2min，離心，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，下層清液經(jīng)0.45μm膜孔濾器過(guò)濾后進(jìn)HPLC分析。

　　7.4測(cè)定

　　7.4.1呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液配制

　　臨用前，取呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.01μg/mL~1.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

　　7.4.2液相色譜測(cè)定

　　根據(jù)樣品液中呋喃唑酮?dú)埩袅壳闆r，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液中呋喃唑酮響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液等體積參插進(jìn)樣進(jìn)行測(cè)定。在上述色譜條件下，呋喃唑酮保留時(shí)間約為5.8min。

　　7.5空白試驗(yàn)

　　除不加試樣外，按7.2~7.4步驟進(jìn)行。

　　8.結(jié)果計(jì)算與表述

　　根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品液的峰高，按式(1)計(jì)算樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅浚?h-h0)×V×1000

　　C=Cs×···································(1)

　　hs×m

　　式中：

　　C──樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅浚瑔挝粸槲⒖嗣壳Э?μg/kg);

　　h──樣品液中呋喃唑酮的峰高;

　　hs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的峰高;

　　h0──空白試驗(yàn)的峰高;

　　Cs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);

　　V──樣品液最終定容體積，單位為毫升(mL);

　　m──樣品的稱(chēng)取量，單位為克(g)。

　　9.線性范圍、檢測(cè)限、回收率

　　9.1線性范圍

　　本方法的呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液線性范圍為0.01μg/mL~1.00μg/mL。

　　9.2檢測(cè)限

　　本方法的檢測(cè)限為1μg/kg。

　　9.3回收率

　　本方法回收率為72.8%~96.2%。