中性粒細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定操作方法

　　中性粒細(xì)胞(Poly morpho nuclearleukocyte，PMN )的功能包括粘附、移動(dòng)、吞噬殺菌等，是機(jī)體天然免疫力的重要組成部分。

　　試劑及材料

　　1.白色葡萄球菌

　　2.肉湯培養(yǎng)基

　　3.鹼性美藍(lán)液

　　操作方法

　　1.菌液的制備將白色葡萄球菌接種于中，放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右;置水浴中加熱100℃10min殺死細(xì)菌，用無(wú)菌生理鹽水稀釋成6×108細(xì)菌/ml備用;

　　2.用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl，立即加入盛有20μl肝素(濃度為20U/ml)的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi)，輕輕攪動(dòng)混勻，再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混勻。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(nèi)(此容器先放37℃溫箱中預(yù)溫)，在37℃溫箱中作用30min，其間每隔10min搖勻一次;

　　3.作用完畢，取1小滴混合液置于潔凈無(wú)油污的載玻片一端，推成薄片。待干后，用甲醇固定4～5min，鹼性美藍(lán)液染2～3min，置油鏡下觀察。隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞，分別記錄發(fā)生吞噬和未吞噬的白細(xì)胞數(shù)，對(duì)有吞噬作用的白細(xì)胞，應(yīng)同時(shí)記錄所吞噬的細(xì)菌數(shù);

　　結(jié)果分析

　　吞噬細(xì)胞%=即100個(gè)中性粒細(xì)胞中吞噬有細(xì)菌的細(xì)胞數(shù);

　　吞噬指數(shù)=將100個(gè)中性粒細(xì)胞所吞噬的細(xì)菌總數(shù)除以100，得到每個(gè)白細(xì)胞吞噬細(xì)菌的平均數(shù)，即為吞噬指數(shù)。