生化實(shí)驗(yàn)室常用儀器操作一覽

　　【冷凍真空干燥機(jī)】

　　基本原理

　　高真空狀態(tài)下，利用升華原理使預(yù)先凍結(jié)的物料中的水份直接從冰態(tài)升華為水蒸汽而被除去，從而使物料干燥。真空冷凍干燥廣泛應(yīng)用于多種產(chǎn)品，可確保物品中蛋白質(zhì)、維生素等各種營(yíng)養(yǎng)成份，特別是那些易揮發(fā)熱敏性成份不損失，因而能最大限度地保持原有的營(yíng)養(yǎng)成份。還能有效防止干燥過程中的氧化，可以避免營(yíng)養(yǎng)成份的轉(zhuǎn)化和狀態(tài)變化。凍干制品呈海綿狀、無(wú)干縮、復(fù)水性好、含水份極少，相應(yīng)包裝后可在常溫下長(zhǎng)時(shí)間保存和運(yùn)輸。

　　操作步驟

　　1、系統(tǒng)準(zhǔn)備

　　檢查系統(tǒng)是否清潔和干燥，真空泵與冷凍機(jī)是否連接，接通電源，檢查排氣口、冷凍管的密封性。

　　2、加樣

　　樣品需要預(yù)冷到至少-40℃，可以在深低溫冰箱(-70℃)或者液氮(-196℃)中進(jìn)行。打開密封管開關(guān)，搬開冷凍艙，將樣品置于冷凍艙里的隔板上。關(guān)閉密封管開關(guān)。

　　3、冷凍

　　打開冷凍開關(guān)，等待20～30分鐘，直到冷凍艙的溫度低于-40℃。

　　4、抽真空

　　打開真空泵開關(guān)，等待10～15分鐘，直到系統(tǒng)壓力低于100 millitorr。

　　5、監(jiān)控過程

　　確保系統(tǒng)參數(shù)(冷凍溫度、真空壓力)在正常范圍內(nèi);

　　定期檢查冷凍艙中的結(jié)冰情況，決定是否要除霜;

　　觀察樣品是否干燥完全，一般干燥過程需要24～72小時(shí)，視具體樣品通過目測(cè)而定。

　　6、關(guān)閉系統(tǒng)

　　關(guān)閉總開關(guān)，接上排氣管或打開密封管開關(guān)以解除真空狀態(tài)。

　　關(guān)閉真空開關(guān)，關(guān)閉冷凍開關(guān)，取出樣品。

　　7、系統(tǒng)維護(hù)

　　除霜：冷凍艙下面的壓縮艙內(nèi)如果有霜，則接上排水管，然后用少量熱水(不能超過壓縮艙容積的一半)促進(jìn)冰霜的融化。不能通過敲擊冰塊來除霜。

　　除濕：壓縮艙、冷凍艙、真空泵壓縮機(jī)以及墊圈等表面的水霧均需擦干。

　　清潔：壓縮艙、冷凍艙可以用溫和的去污劑或蘇打水來清洗，然后干燥并撤去排水管，并重新密封排水孔。

　　泵油：定期檢查油位，排除油霧。

　　注意事項(xiàng)

　　1、樣品要保持冷凍，不能“回融”。

　　大多數(shù)溶劑的冰點(diǎn)高于-40℃，所以冷凍艙溫度低于-40℃可以使一般樣品保持冰態(tài)。

　　為確保樣品不“回融”，可將冰凍的樣品制成小于20 mm的小塊。

　　2、有毒或有腐蝕性的樣品。

　　最好不要用來冷凍干燥，如果一定要用，則更加需要系統(tǒng)維護(hù)，并需要另外定購(gòu)特定的濾器以保護(hù)真空泵。

　　3、真空泵油需保持干凈。

　　微黃或無(wú)色的油是干凈的，顏色變深表示有酸污染，霧狀渾濁表示有水污染。有污染時(shí)需要更換好油。

　　【自動(dòng)雙重蒸餾水器】

　　操作說明

　　1.擰開自來水龍頭，讓水流開始較為細(xì)小，觀察第一管水位超過石英加熱管;

　　2. 接通電源，按下第一管的ON開關(guān)，這時(shí)水速仍以細(xì)小為主，等待第一管內(nèi)自來水沸騰，這時(shí)候?qū)⑺�流逐漸調(diào)大至適中程度;

　　3. 等待第二管內(nèi)自來水超過石英加熱管，按下第二管的ON開關(guān)，第二管隨即加熱，注意觀察兩個(gè)管子的水位變化，及時(shí)做出調(diào)整。

　　4.一般來說有下面三種情況：

　　a→第一管水位過高，接近水蒸氣散出口，這時(shí)宜將調(diào)整水位的橡膠管放置低于玻璃管位置，待自來水流出至適當(dāng)位置，將橡膠管回復(fù)原位;

　　b→第一管水位過低，調(diào)整自來水龍頭加大進(jìn)水，或者調(diào)節(jié)橡膠管上控制開關(guān)加大進(jìn)水，乃至關(guān)閉電源待進(jìn)水到適當(dāng)位置，重新打開電源，繼續(xù)蒸餾。

　　C→第二管水位過低，按下第二管的OFF開關(guān)，待水位升高超過石英加熱管時(shí)再開始蒸餾。

　　5. 雙蒸結(jié)束，先關(guān)閉控制面板上OFF兩個(gè)電源，然后關(guān)自來水龍頭。

　　【高壓鍋】

　　操作程序

　　1.打開鍋蓋，倒入蒸餾水，滿至WATER　LEVEL，以后每次使用時(shí)，必須補(bǔ)足水滿到WATER　LEVEL。

　　2.把插頭插上電源，按電源開關(guān)ON，顯示器指示燈亮起，機(jī)器開始進(jìn)行程序自檢。

　　3.按顯示屏的提示輸入工作密碼。

　　4.放置待滅菌的物品入滅菌室，并旋緊鍋蓋。

　　5.根據(jù)所高壓物品的不同，按過程選擇鍵1-6中的某一數(shù)字選擇不同的滅菌流程。一般固體滅菌選擇按鍵4，液體滅菌選擇按鍵5。特殊要求的，可以先按下MODE鍵，輸入工作密碼。選擇要重新設(shè)置的項(xiàng)目進(jìn)行修改。

　　6.按啟動(dòng)鍵START鍵，即開始此滅菌模式。

　　NOTE：須待機(jī)器進(jìn)入正常運(yùn)行程序后，人方可離開。

　　7.當(dāng)滅菌流程結(jié)束時(shí)，響鈴鳴叫30秒。

　　8.確認(rèn)壓力顯示器的壓力降為0以后，把鍋門把手旋松，讓殘余蒸氣釋出，待5-10分鐘后推開跨桿，準(zhǔn)備取出滅菌物品。如需高壓另一鍋，則需重新加水滿到WATER　LEVEL，同時(shí)處理廢水收集瓶中的廢水。

　　9.在高壓鍋使用記錄上進(jìn)行登記。

　　【離心機(jī)】

　　操作步驟：

　　1、將離心機(jī)打開，儀器此時(shí)的工作狀態(tài)為最后操作設(shè)置的參數(shù)。

　　2、平衡離心管，兩兩對(duì)稱放入離心機(jī)。

　　3、蓋好離心蓋，蓋子鎖上時(shí)才能離心。

　　4、選擇操作模式：

　　設(shè)置參數(shù)：1)離心速度：300rpm~14000rpm;2)離心時(shí)間：1min~99min;

　　3)離心溫度：-10℃～40℃;4)最低加速度：1～5個(gè)，1最慢

　　5)最低減速度：0～4 coast-down,(0是慣性)

　　(1)手工模式：不重新設(shè)置時(shí)，按上次設(shè)置的參數(shù)離心，可以重新設(shè)置參數(shù)離心。

　　(2)程序模式：可預(yù)先設(shè)置5個(gè)程序儲(chǔ)存，不同的程序按不同的序號(hào)，相應(yīng)的指示燈亮，再按另外的序號(hào)可以選另外的程序。

　　(3)瞬時(shí)(MOM)操作模式：持續(xù)按MOM鍵，可使離心達(dá)到最大速度和最大加速度，當(dāng)放開時(shí)離心減慢直到停止，離心時(shí)顯示的時(shí)間是已經(jīng)用了的時(shí)間(以秒計(jì)數(shù))。

　　5、按START鍵，開始離心，綠燈亮。此時(shí)顯示實(shí)際的離心速度和溫度，時(shí)間為剩余時(shí)間。

　　6、當(dāng)設(shè)置時(shí)間到，離心機(jī)通過制動(dòng)裝置自動(dòng)停止離心，黃燈亮，可以打開離心蓋。

　　如何設(shè)置相應(yīng)參數(shù)?

　　1、用”key-programe”取消錯(cuò)選的程序。

　　2、用“SOFT ACL”鍵設(shè)置加速度：高加速燈滅，低加速燈亮;按住鍵3秒，燈閃爍，用設(shè)置離心速度的鍵選擇1～5

　　3、用“SOFT DCL”鍵設(shè)置加速度：高減速燈滅，低減速燈亮;按住鍵3秒，燈閃爍，用設(shè)置離心速度的鍵選擇0～4

　　4、設(shè)置離心溫度、速度和時(shí)間：當(dāng)“SET”燈閃爍時(shí)，可以改變參數(shù)，用箭頭鍵選擇。設(shè)置后3秒，燈停止閃爍，自動(dòng)確認(rèn)。

　　如何記憶一個(gè)程序?

　　1、在設(shè)置的參數(shù)閃爍時(shí)，按程序鍵1～5，當(dāng)程序鍵旁的燈亮?xí)r，參數(shù)被儲(chǔ)存。

　　2、保護(hù)程序不被修改：可以在參數(shù)閃爍時(shí)，按一個(gè)程序鍵的同時(shí)按下“LOCK PROG(STOP)”鍵。取消保護(hù)時(shí)再次按程序鍵同時(shí)按下“LOCK PROG(STOP)”鍵。

　　警告信息：

　　1、END：在每次離心循環(huán)結(jié)束時(shí)顯示，在進(jìn)行下一次操作時(shí)顯示設(shè)置得參數(shù)。

　　2、LID:當(dāng)離心開始而蓋子沒蓋緊時(shí)顯示，并報(bào)警。

　　3、IMBAL:當(dāng)離心物品不平衡時(shí)顯示，并報(bào)警。

　　4、MAIMS:當(dāng)動(dòng)力系統(tǒng)出錯(cuò)時(shí)顯示。

　　5、OVERT：當(dāng)離心室里的溫度>45℃時(shí)顯示。

　　6、SET:當(dāng)設(shè)置速度大于最大離心速度時(shí)顯示。

　　注意事項(xiàng)：

　　1、離心時(shí)不要移動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)儀器。

　　2、不要使用說明書不允許使用的轉(zhuǎn)子和附屬物。

　　3、不能超過最大轉(zhuǎn)速。

　　4、不使用不適合離心的管子或瓶子。

　　5、不在儀器周圍放置危險(xiǎn)品。

　　6、不使用易燃易爆物。

　　【雜交爐】

　　操作步驟

　　1、設(shè)置溫度

　　按一下up或down鍵，顯示屏將由亮到暗開始閃爍，此時(shí)顯示的是上次設(shè)置的溫度。如需改變，則通過up或down鍵來上調(diào)或下調(diào)。停按5秒鐘后，數(shù)字停止閃爍，并開始顯示爐內(nèi)溫度。(第一次使用前需要至少24小時(shí)來穩(wěn)定加熱器。)

　　2、校準(zhǔn)

　　需要校準(zhǔn)顯示溫度與實(shí)際溫度是否一致。將一枝標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)置于樣品附近，穩(wěn)定1小時(shí)后，比較2者的數(shù)值是否一致。

　　如需校準(zhǔn)，則同時(shí)按住up和down鍵直到顯示屏上數(shù)字中前后2個(gè)小數(shù)點(diǎn)開始閃動(dòng)，然后用up或down鍵來改變數(shù)值，使其與溫度計(jì)的參考數(shù)值一致。再次穩(wěn)定加熱器。

　　3、轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)

　　轉(zhuǎn)動(dòng)開關(guān)有3個(gè)位置，上位表示開，其轉(zhuǎn)速可在0～15 RPM之間調(diào)節(jié);中位表示關(guān);下位表示短時(shí)間轉(zhuǎn)動(dòng)，按住才轉(zhuǎn)動(dòng)松開即關(guān)。

　　維護(hù)

　　使用前后觀察系統(tǒng)是否清潔，如果不是，則需要清洗。

　　1、顱腔

　　用肥皂和水進(jìn)行清洗，然后干燥。如有污染，則用適當(dāng)?shù)南�毒劑清洗，注意不要用含氯漂白劑，否則容易造成損壞。

　　2、接水盤和旋轉(zhuǎn)架

　　先取下來，然后用同樣的溶液進(jìn)行清洗。

　　【干膠儀】

　　操作步驟

　　1.將干膠儀的排水管連接到真空泵上，閥門旋到開的位置。

　　2.打開電源開關(guān)。

　　3.選擇干膠CYCLE：

　　a.按CYCLE健兩次;

　　b.當(dāng)燈在閃動(dòng)狀態(tài)時(shí)，按RAISE或LOWER健選擇干膠CYCLE。

　　4. 選擇循環(huán)溫度：

　　a.按TEMP鍵兩次;

　　b. 當(dāng)燈在閃動(dòng)狀態(tài)時(shí)，按RAISE或LOWER健選擇溫度。

　　5.選擇循環(huán)時(shí)間：

　　a.按TIME鍵兩次;

　　b. 當(dāng)燈在閃動(dòng)狀態(tài)時(shí)，按RAISE或LOWER健選擇時(shí)間。

　　6.將膠放在干膠儀里(將膠放在透明的保護(hù)蓋的下面，在膠的表面覆蓋一層塑料薄膜)。

　　7.打開真空泵。

　　8.按START鍵開始干膠程序。

　　9.干膠程序完成后，打開透明的保護(hù)蓋，閥門旋到開的位置，然后關(guān)掉真空泵。

　　干膠時(shí)間的選擇

　　膠的濃度 膠的厚度 80℃所需時(shí)間

　　3%至20% 0.375mm　　　　　　　　30min

　　3%至20% 0.5mm 40min

　　3%至10% 0.75mm 40min到60min

　　10%至20% 0.75mm 60min到120min

　　3%至10% 1.5mm 45min到60min

　　10%至20% 1.5mm 60min到120min

　　3%至10% 3mm 60min到120min

　　10%至20% 3mm 120min到180min

　　【Leica熒光顯微鏡】

　　簡(jiǎn)要操作步驟

　　1.打開12V/100W Leica的電源開關(guān),至少預(yù)熱10分鐘。

　　2.打開顯微鏡的電源開關(guān)。

　　3.放置樣品，調(diào)好放大倍數(shù)、焦距和視野。

　　4.移動(dòng)light stop至 。

　　5.滑動(dòng)filter block至相應(yīng)光路。

　　6.將光線調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)到最小。

　　7.鏡下觀察樣品的熒光染色情況。

　　8.如果樣品有微紅色背景，可以將BG 38 filter移動(dòng)至 ，以消除背景色的干擾。

　　9.如要拍照，需將相機(jī)與顯微鏡連接，將顯微鏡上的拉桿拉出，這時(shí)在相機(jī)上可直接觀察樣品的熒光染色情況，并拍照保存。

　　10.結(jié)束后，關(guān)掉顯微鏡和12V/100W Leica的電源開關(guān)。

　　【PCR儀】

　　操作步驟：

　　-RUN ENTER

　　PROGRAM PROGRAM

　　1、開機(jī)：打開開關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后，顯示RUN-ENTER菜單：準(zhǔn)備執(zhí)行程序。

　　2、放入樣本管，關(guān)緊蓋子。

　　3、如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲(chǔ)存的程序，按《Proceed》，則屏幕顯示：

　　-ENABLE DISABLE

　　heated lid

　　按《Proceed》選擇ENABLE，則開始執(zhí)行程序。

　　-NEW LIST

　　EDIT DELET

　　4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》，屏幕顯示

　　Step 1 _TEMP

　　GOTO Opiton End

　　按《Proceed》，1)選擇NEW,命名新的程序，最多8個(gè)字母，輸入后按《Proceed》確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字)。

　　2)輸入程序步驟：名字輸入后，顯示

　　按《Proceed》則可以輸入溫度(0～100℃)，按《Proceed》確認(rèn)后，則可以輸入孵育時(shí)間，用《Select》鍵移動(dòng)光標(biāo)，輸入數(shù)字，完成后按《Proceed》確認(rèn)，跳到下一步，輸入方式同上。

　　3)選擇GOTO，輸入循環(huán)步驟時(shí)鏈接到第幾步(循環(huán)數(shù)最多可達(dá)9999次)(為實(shí)際循環(huán)數(shù)-1)。

　　Step extend

　　Increment slope

　　4) 選擇option,再選擇increment,按《Proceed》確認(rèn)，輸入初始的溫度，確認(rèn)后輸入時(shí)間，按《Proceed》確認(rèn)，然后輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的溫度，增加用正值，減少用負(fù)值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》確認(rèn)。

　　選擇extend, 按《Proceed》確認(rèn),輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的時(shí)間(-60～60秒)，按《Proceed》確認(rèn)。

　　選擇slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》確認(rèn)，然后輸入加熱或致冷的速度，按《Proceed》確認(rèn)。

　　4)選擇End,輸入結(jié)束步驟。

　　5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運(yùn)行。

　　6、其它：用《pause》可以暫停一個(gè)運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)程序。

　　用《stop》或《Cancel》可停止運(yùn)行的程序。

　　編輯程序：

　　1、可以用《Cancel》鍵刪除輸錯(cuò)的值，輸入新的值后按《Proceed》確認(rèn)。

　　2、對(duì)于未輸完的程序，要先輸入END，按《Proceed》將程序儲(chǔ)存后才能刪除。

　　3、刪除已經(jīng)儲(chǔ)存的程序：從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇DELET,用《Select》選擇刪除。

　　4、查看程序的步驟：在主菜單上選擇LIST，按《Proceed》，用《Select》將選擇名稱，再按《Proceed》，顯示程序的第一步，用《Select》鍵向前、向后翻頁(yè)查看，此時(shí)不能改變程序的值。

　　編輯已有的程序：

　　1、從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇EDIT，按《Proceed》確認(rèn)，用《Select》鍵選擇要編輯的程序，按《Proceed》顯示程序的第一步。

　　2、用《Select》鍵將光標(biāo)移到要改變的溫度或循環(huán)的值上，鍵入新值，按《Proceed》確認(rèn)，按《Cancel》刪除鍵入的值，出現(xiàn)空格，鍵入新值后確認(rèn)。

　　注：一旦值被改變或刪除，原來的值不能恢復(fù)，必須重新鍵入。

　　3、編輯時(shí)間值：必須重新鍵入小時(shí)、分鐘、秒，按《Proceed》。

　　如何設(shè)置一個(gè)PCR體系：

　　一般分為8步：

　　1、預(yù)變性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

　　2、變性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

　　3、退火：溫度自定，30s~2min。

　　4、延伸：70～75℃，一般72℃，對(duì)于〈2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。

　　5、循環(huán)數(shù)：一般25～35個(gè)循環(huán)。

　　6、最終延伸：72℃，5～15min。

　　7、保存：10℃，時(shí)間設(shè)為0。

　　8、END。